ABON (ACON) Laboratories, США – КНР
Тест-кассеты для быстрого определения Д-димера (цельная кровь//плазма)
Производитель: AGEN Biomedical Ltd Брисбен, Квинсленд, Австралия
Быстрый хроматограффический тест для качественного определения содержания Д-димера в плазме и цельной крови у человека: для использования в качество вспомогательного средства при обследовании пациентов с подозрением ка диссеминированное внутрисосудистое свертывание (ДВС), тромбоз глубоких вен (ТГВ) и тромбоэмболию легочной артерии (ТЭЛА)
В процессе свертывания крови фибриноген превращается в фибрин под действием тромбина. Возникающие при этом мономеры полимеризуются и образуют растворимый гель из не попоречно связанного фибрина. Затом фибриновый гель превращается в поперечно связанный фибрин под действием тромбин-активируемого фактора XIII формируя нерастворимый фибриновый сгусток. Производство плазмина, основного ферментного стимулятора фибринолиза инициируется при 06разовании фибринового сгустка.
Хотя и фибриногон, и фибрин расщепляются под действием фибринолитического ферменга пладмина ло продуктов распада, однако только продукты распада поперечно связанного фибрина содержат Д-димер и называются «продуктами распада поперечно связанного фибрина». Следовательно, производные фибрина в крови и плазме крови человека, содержащие Д-димер, являются специфическими маркерами фибринолиза.
В тесте Clearview Simplify Д-димер специфичные к Д-димеру моноклональные мышиные антитела DD3B64, связанные с коллоидными частицами золота, используются для выявления молекул, содержащих Д-димер. Конъюгат антител с золотом специфически связывается с содержащимися Д-димер молекулами в образце крови пациента и формируется комплекс — «антитело-золото-Д-димер». Комплекс «антитело- золото - Д димер" мигрирует через мембрану в водную фазу, где захватывается и концентрируется в зоне, в которой находятся специфичные к Д-димеру- монокло- альные мышиные антитела.
Образование комплектов в зтой зоне (тестовая зонаТ) приводит к появлению в тестовой зоне красной (или розовой) линии. Если концентрации Д-димера не превышают максимальное значение нормы, линия в тестовой зоне (Т) не появится. Не захваченный коньюгат золота продолжает двигаться до конца полоски, где связывается с моноклональными мышиными антителами в зоне процедурного контроля (ПК). Появление розовой или красной линии ПК указывает на правильную работу теста.
Хранение: хранить при температуре от +2°С до +25°С. Не допускать замораживания.
Срок годности: дату истечения срока годности см. на упаковке.
Тест-кассеты — 10 шт.
Каждая тест-кассета упакована в индивидуальный пакет из фольги с влагопоглотителем.
Активные ингредиенты в тест-кассете: Д-димер-специфичные моноклональные мышиные антитела, связанные с коллоидными частицами золота; Д-димер-специфичные моноклональные мышиные антитела и овечьи антимышиные Ig G антитела.
Буфер — 1*2,6 мл
Изотонический солевой раствор (0,9% хлорида натрия), содержащий 0,05% азида натрия в качестве консерванта.
Пипетка для капиллярной крови — 10 шт.
Одноразовые капиллярые пипетки для использования с кровью, взятой из пальца.
Пипетка для венозной крови — 10 шт.
Одноравовые венозные пипетки для использования с цельной венозной кровью. Не смешивайте составляющие разных комплектов.
Для проведения данного теста пригодна цельная кровь (венозная или из пальца) либо плазма.
Кровь из пальца.
Следуйте рекомендуемой процедуре забора крови из пальца.
1. Протрите палец пациента спиртовой салфеткой. (рисунок)
2. Собирая кровь из пальца, используйте пипетку для капиллярной крови, прилагаемую к комплекту. Не используйте пипетки для венозной крови!
3. Держа пипетку горизонтально, дотроньтесь ее наконечником до капли крови на пальце пациента.
4. Не сдавливайте пипетку во время забора крови и не закрывайте полностью воздушное отверстие. Кровь автоматически попадет в пипетку под воздействием капиллярных сил.
5. Дождитесь, пока пипетка заполнится до черной отметки.
6. Внесите образец крови из пипетки в лунку для образца на тест-кассете (см. шаг процедуры 1а).
Цельная венозная кровь.
1. Заберите цельную кровь с помощью венепункции в пробирку с антикоагулянтом цитратом натрия (девять частей цельной венозной крови на одну часть 3.2% тр натрий цитрата), гепарином или ЭДТА.
2. Храните образцы крови в холодильнике и используйте не позднее, чем в течение 24 ч после забора.
3. Образцы с признаками свертывания крови непригодны для тестирования!
4. Образцы с показателями гематокрита, выходящими за рамки нормальных, могут менять чувствительность теста Clearview Simplify Д-димер из-за различий во фракции плазмы.
Плазма
1. Заборите цельную кровь с помощью вонопункции в пробирку с антикоагулянтом цитратом натрия (девять частой цельной венозной крови на одну часть 3.2% тринатрий цитрата), гепарином или ЭДТА.
2. Центрифугируйте образец в течение 15 минут (1500 g) при температуре от +4°С до +10°С), а далее номедленно отделите плазму от кровяных клеток.
хранение/стабильность плазмы:
0т+20°С до +25°С: 8 часов
от +2°С До +8°0: 4 дня
при -20°С: 2 месяца
Замороженные образцы плазмы должны размораживаться при температуре +37°С и должны быть тщательно перемешаны перед началом тестирования.
Внимание!
1. Извлеките тест-кассету из герметичной индивидуальной упаковки и поместите её на плоскую горизонтальную чистую поверхность.
1а. Кровь из пальца.
ПРИМЕЧАНИЕ: для работы с образцами капиллярной крови из пальца используйте капиллярные пипетки, прилагаемые к комплекту.
Поместите пипетку с образцом крови из пальца в вертикально над лункой для образца тест-кассеты. Выдавите всю кровь (35 мкл) из капиллярной пипетки в лунку для образца.
Примечание: если кровь не выходит из капиллярной пипетки, зажмите пальцем воздушное отверстие и снова сдавите пипетку. После использования капиллярную пипетку необходимо поместить в резервуар для биологически опасных отходов.
1б. Цельная венозная кровь
ПРИМЕЧАНИЕ: для работы с образцами венозной крови используйте венозные пипетки, прилагаемые к комплекту.
Сдавито пипетку у запаянного конца. Поместите открытый конец пипетки в образец крови. Ослабьте давление пальцов, так чтобы образец крови попал в пипетку. Далее, держа пипетку вертикально, выдавите 1 каплю (35 мкл) цельной крови в лунку для образца на тест-кассете. Использованную пипетку необходимо поместить в резервуар для биологически опасных отходов.
1в. Плазма
Для образцов плазмы используйте лабораторную пипетку (отсутствует в комплекте). НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ капиллярные или венозные пипетки, прилагаемые к комплекту.
1. Внесите 20 мкл плазмы в лунку для образца на тест-кассете.
2. Подождите, пока образец полностью впитается, прежде чем добавлять буфер. Держите флакон в вертикальном положании, внесите 2 капли буфера в лунку для образца.
3. Оставьте тест-кассету на ровной горизонтальной поверхности на время реакции. Учитывать результаты нообходимо через 10 мин.
Для уверенности в правильном функционировании тест-кассеты Clearview Simplify Д-димер рекомендуется проверить как положительный, так и отрицательный результат через равные промежутки времени. Необходимость в контрольных образцах надо учитывать при заказе каждой новой партии Clearview Simplify Д-димер, особенно в ситуации когда достоверность результатов подвергается сомнению. Положительные контрольные образцы должны проявляться как положительный результат от слабого до умеренного в тестовой зоне (Т) и иметь ясно различимую линию ПК. Отрицательные образцы должны дать отрицательный результат. Контрольные образцы могут быть протестированы одиовременно с процедурой тестиравания образца пациента. Контрольные образцы Clearview Simplify Д-димер, номенклатурный номер 6101 KCV, можно заказать через компанию Inverness Medical или вашего местного дистрибьютора.
Достоверность теста
- Достоверный результат: розовая или красная линия должна присутствовать в зоне ПК.
- Недостоверный результат: в зоне ПК окрашенной линии нет. Тест-кассета работает неправильно. Тестирование необходимо повторить с помощью другой тест-кассеты.
Положительный результат: наличие розовой или красной линии в тестовой зоне (Т).
Отрицательный результат: Полное отсутствие розовой или красной линии в тестовой зоне (Т).
Примечания
Запрещается ставить диагноз исключительно на основе результата теста Clearview Simplify Д-димер.
При постановке диагноза необходимо учитывать также клинические симптомы и другую информацию (например, предтестовую систему оценки клинической вероятности по Уэллсу).
Повышенная концентрация Д-димеров указывают на активный фибринолиз и отмечается у пациентов с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС)7-10, тромбозом глубоких вен (ТГВ) и тромбоэмболией легочной артерии (ТЭЛА). Повышенная концентрация Д-димеров также отмечается после хирургических операций и травм, при серповидно-клеточной анемии, при болезнях печени, серьезных инфекциях, сепсисе, воспалении, при злокачественных заболеваниях и у пожилых людей. Кроме того, уровень Д-димеров повышается во время нормального течения беременности, хотя очень высокий уровень Д-димеров связывают с осложнениями.
Положительный результат, свидетельствующий об активном фибринолизе, должен проявиться при использовании теста Clearview Simplify Д-димер в случае, когда концентрация Д-димеров превышает максимальное значение нормы — около 80нг/мл, по результатам измерения методом ELISA (DIMERTEST GOLD EIA).
Образцы крови здоровых доноров (п=99)
Исследование, проведенное компанией AGEN Biomedical Ltd Брисбен, Квинсленд, Австралия.
Исследование больных ТГВ.
Клиническая эффективность Clearview Simplify Д-димер оценивалась следующим образом.
№=120 амбулаторных больных, последовательно поступивших на обследование с подозрением на ТГВ. Результаты исследования Clearview Simplify Д-димер сравнивались с результатами теста BioMerieux Vidas D-Dimer New. Диагноз ТГВ подтверждался в ходе компрессионного ультразвукового исследования (КУЗ).
* — доверительные интервалы 95%, ОПЦ-отрицательная прогностическая ценность
Исследование больных ТЭЛА
Клиническая эффективность Clearview Simplify Д-димер оценивалась в ретрослективном исследовании эффективности.
№527 пациентов, последовательно поступивших на обследование с подозрением на ТЭЛА и жалобами на боль в груди. Результаты исследования Clearview Simplify Д-димер сравнивались с результатами теста BioMerieux Vidas D-Dimer New и Diagnostika Stago Sta Liatest D-Di (n=479).
Диагноз ТГВ подтверждался в ходе вентиляционно-перфузионной пульмоносцинтиграфии, КТ-сканирования или легочной ангиографии.
Вещества, мешающие анализу.
Не было обнаружено зависимости результата теста от содержания в образце следующих веществ, в указанных концентрациях либо ниже: билирубина (0,2 г/л), жиров (30 г/л), белков (60 г/л, гамма-глобулин) и гемоглобина (10 г/л).
Ревматоидный фактор
При исследовании 29 образцов крови, взятых у пациентов с ревматоидным артритом, 13 образцов дали положительный результат в тесте Clearview Simplify Д-димер. Во всех 13 образцах положительную реакцию удалось блокировать добавлением Д-димер-специфических моноклональных антител. При этом добавление неспецифических антител той же подгруппы, IgG1, не оказало влияния на результаты, все результаты остались положительными. Это позволяет предположить, что Clearview Simplify Д-димер нечувствителен к интерференции ревматоидного фактора.